As penicilinas penicilinase-resistentes exercem uma ação bactericida contra microorganismos sensíveis durante a multiplicação ativa. Todas as penicilinas inibem a biossíntese da parede celular bacteriana. A oxacilina é ativa contra a maioria dos cocos Gram-positivos, incluindo os estreptococos betahemolíticos, pneumococos e estafilococos não-produtores de penicilinase. Devido à sua resistência a enzima penicilinase, a oxacilina é ativa também contra estafilococos produtores de penicilinase.